胰蛋白酶 - EDTA 消化液(0.25%)含酚红是细胞培养中常用的细胞解离试剂,主要用于将贴壁生长的细胞从培养容器表面分离下来,以便进行细胞传代、计数、冻存或其他实验操作。
在组织细胞的体外培养和原代细胞培养中的组织细胞分散(将组织块制备成单个细胞悬液)以及传代细胞培养中,贴壁生长细胞的消化分散均要使用组织细胞消化液。常用的消化液为胰蛋白酶,EDTA等,其功能主要是使细胞间的蛋白质(如细胞外基质)水解,使组织或贴壁细胞分散成单个细胞,制成细胞悬液用于进一步的实验。
本品经过滤除菌,可以直接用于培养细胞和组织的消化。本产品具有方便快速、稳定安全、细胞状态好等特点。通常室温消化2分钟左右就可以消化下大多数贴壁细胞。
主要成分及作用
胰蛋白酶(0.25%):胰蛋白酶是一种丝氨酸蛋白酶,来源于牛或猪的胰腺,其主要作用是水解细胞间以及细胞与培养容器表面连接的蛋白质(如胶原蛋白、纤维连接蛋白等),使贴壁细胞脱离基质,分散成单个细胞或小细胞团。0.25% 是细胞培养中常用的浓度,适用于多数哺乳动物细胞(如 HeLa、CHO、293T 等)。
EDTA:EDTA(乙二胺四乙酸)是一种螯合剂,其作用是结合细胞外液中的钙离子(Ca²⁺)和镁离子(Mg²⁺)。这些离子在维持细胞间连接和细胞贴壁中起重要作用,EDTA 通过螯合它们,破坏细胞间的黏附,增强胰蛋白酶的解离效果,提高细胞分散效率。
酚红:酚红是一种 pH 指示剂,在溶液中随 pH 变化呈现不同颜色:中性偏碱(pH 7.2-7.4,适合细胞培养的环境)时呈红色;酸性条件下(pH < 6.8)呈黄色;
碱性过强(pH > 7.6)时呈紫色。
其作用是直观反映消化液的 pH 变化,确保溶液处于适合细胞存活的酸碱环境,同时提示是否需要调整或更换试剂。
溶液特性
外观:通常为红色澄清液体(因含酚红,且 pH 维持在 7.2-7.4 左右)。冻存状态可能存在颜色不均匀现象,不影响正常使用。
渗透压:与细胞培养液渗透压相近,避免细胞因渗透压剧烈变化而受损。
储存条件:需在 - 20℃冷冻保存,有效期1年,避免反复冻融(可分装后使用);解冻后短期(1-2 周)可存放于 4℃,但需尽快使用,以防胰蛋白酶活性下降。
使用方法:
1. 贴壁细胞的消化:
吸去培养液,用无菌的PBS、Hanks液或无血清培养液洗涤细胞一次,以去除残余的血清。
加入少量胰蛋白酶消化液,盖过细胞即可,室温放置1-2分钟。不同的细胞消化时间有所不同,对于贴壁牢固的细胞可适当延长消化时间。
显微镜下观察,细胞明显收缩,并且肉眼观察培养器皿底部发现细胞的形态发生明显的变化;或者用枪吹打细胞发现细胞刚好可以被吹打下来。此时吸除消化液。加入含血清的细胞培养液,吹打下细胞,即可直接用于后续实验。
如果发现消化不足,可加入胰蛋白酶消化液重新消化。
如果发现细胞消化时间过长,未及吹打细胞,细胞已经有部分直接从培养器皿底部脱落,直接用胰酶细胞培养液把细胞全部吹打下来。1000-2000g离心1分钟,沉淀细胞,尽量去除胰酶细胞消化液后,加入含血清的完全培养液重新悬浮细胞,即可用于后续实验。
2. 组织的消化:
不同的组织需要消化的时间相差很大,通常以消化后可以充分打散组织为宜。
注意事项:
1.由于组织或细胞性质不同,实验人员应依据具体情况,确定最佳消化时间;消化细胞时间不宜过长,否则会影响细胞贴壁和生长状况;
2.本产品不含抑菌剂,在使用过程中要特别注意无菌操作,避免消化液被微生物污染;
3.不宜4℃长期保存,切忌反复冻融,小量使用时建议分装冻存;
4. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
产品仅供研究使用,不适用于人或动物的体外诊断与治疗。
由于实验受多种因素影响具有不确定性,以上说明仅供参考,z终解释权归本司所有。
适用场景
贴壁细胞的传代培养(主要用途)
细胞计数前的分散处理
细胞冻存前的单细胞悬液制备
细胞分离、纯化或转染前的预处理等